Методы определения сальмонеллы
Профилактические мероприятия по предотвращению сальмонеллёза на предприятиях, методы выявления сальмонеллы.
Сальмонеллёз - одно из наиболее распространенных инфекционных заболеваний на предприятиях промышленного животноводства (свиноводства) и птицеводства. Эта болезнь также очень опасна и для человека. В соответствии с заключением экспертов Всемирной Организации Здравоохранения эта инфекция одна из самых сложных - она с трудом поддается мерам профилактики и, в случае выявления заражения сальмонеллами, их очень сложно уничтожить.
Объемы производства свинины и продукции птицеферм (мяса и яиц) растут из года в год, ежегодно открывается большое количество новых животноводческих и птицеводческих предприятий, а также расширяются уже работающие организации. Возрастает количество птицы на 1 квадратный метр, уплотняется размещение свиней. Возникают сложности с сохранением санитарного разрыва - он в лучшем случае сокращается, в худшем - вообще не происходит. Все это приводит к ухудшению эпидемиологической обстановки на свино- или птицеферме.
Столкновение животноводческого или птицеводческого хозяйства с сальмонеллёзом влечет за собой смерть молодняка, порчу продукции, что приносит большие убытки. Переболевшее сальмонеллёзом животное или птица уже не способно дать продукт высокого качество или произвести здоровое потомство, снижается яйценоскость, удой и т.д.В случае обнаружения сальмонелл в конечном продукте контролирующими органами на предприятие налагается большой штраф или возможную приостановку деятельности.
Основным источником сальмонеллёза являются зараженные животные или птицы. Основной путь передачи заболевания - употребление продуктов питания обсеменённых возбудителями этого заболевания. По оценке Всемирной Организации Здравоохранения более 40% случаев заболевания у людей вызываются либо вследствие потребления зараженного мяса птицы или яиц.
Сальмонеллёз в животноводческих и птицеводческих хозяйствах превратился в серьезную проблему из-за недостаточного мониторинга здоровья птицы. В среднем зараженность сальмонеллой доходит до 50%, что является огромной цифрой.
На рынке регулярно появляются продукты для лечения сальмонеллёза птицы, а также на птицефабриках по всему миру используется большое количество антибиотиков и других антибактериальных препаратов. Это с одной стороны делает продукцию безопасной для употребления, а с другой стороны приводит к повышению резистентности бактерий. В Европе этот показатель составляет около 30%, в странах Азии - до 90%, поскольку там огромные объемы производства мяса птицы и яиц.
Резистентность сальмонеллы не только усложняет лечение животных и птицы, но и делает возможным передачу заболевания человеку через готовую продукцию. В результате человек может заболеть формой сальмонеллёза, которая является устойчивой к антибиотикам. От этого заболевания ежегодно погибает от 700 до 1000 человек по всему миру.
Поэтому при профилактике сальмонеллёза наиболее выигрышным решением будет сосредоточиться на снижении плотности посадки птицы на птицефермах и вакцинации птицы и животных. Эти меры уже были приняты в ряде европейских стран и они показали свою эффективность. Дополнительный плюс снижения плотности посадки - возможность собирать больше живой массы. Помимо этих мер также необходим контроль безопасности кормов и повышать уровень биобезопасности на предприятиях.
С точки зрения микробиологии Salmonella это палочковидная не спороносная грамотрицательная бактерия. Впервые она была обнаружена в 1880 году в селезенке и лимфатических узлах человека, погибшего от брюшного тифа. Чистая культура возбудителя была выделена в 1884 году. Сальмонеллы представляют собой большую группу бактерий, систематика которых претерпевала значительные изменения по мере получения информации об их структуре и биохимических свойствах.
Сальмонелла поражает желудочно-кишечный тракт. Бактерии довольно долго спосбны жить во внешней среде, они активны и устойчивы к большинству природных факторов. Сальмонеллы несколько месяцев способны сохранять жизнеспособность в пыли, водоемах, замороженном мясе, яйцах, сыром молоке. В морозильных и холодильных камерах сальмонеллы свободно живут и размножаются. В фекалиях больных животных сальмонеллы не теряют активности в течение 2 лет. Они способны мигрировать на животных на другие поверхности. Губительны для сальмонеллы кипячение и правильно подобранные дезинфицирующие средства.
Сальмонелла легко передается с водой или пищей, поэтому необходимо проверять корма и воду, которые поступают на птицефабрику или животноводческое хозяйство.
Возможен также путь передачи сальмонеллы через недостаточно чистые руки персонала, через спецодежду или плохо очищенные поверхности, а также воздушно-капельным путем от одного животного или птицы к другому.
Сальмонелла способна поражать различные органы, но чаще всего страдает желудочно-кишечный тракт. Заражение приводит к сильнейшей интоксикации и гибели всей микрофлоры кишечника. Заболевание сопровождается высокой температурой, а также рвотой и диареей. Далее с фекалиями сальмонеллы выделяются в окружающую среду и опять распространяется далее. Сальмонеллёз протекает с одинаковыми симптомами и у человека, и у животных. При отсутствии своевременного лечения заболевание может привести к летальному исходу.
Наиболее подвержены заражению сальмонеллой птицефабрики. Непрерывность технологического процесса получения птицеводческой продукции и концентрация большого числа особей на небольшой площади приводят к возрастанию микробного давления, что является благоприятным фактором для возникновения различных болезней, в том числе сальмонеллёза.
Высокая скученность птицы также снижает иммунный статус особей, делая их более подверженным заражению различными инфекциями, а также значительно повышая скорость распространения инфекции внутри поголовья. Распространению сальмонеллёза способствуют также и межхозяйственные связи, например, использование возвратной тары.
Сальмонеллёзом могут быть заражены и внешне здоровые животные. В этом случае возбудитель выделяется вместе с биологическими жидкостями - выделениями из ротовой полости, носовых ходов и т.д. Чаще всего сальмонеллёз распространяется через яйца домашних или диких птиц, а также через недостаточно чистые руки человека.
Экономически выгоднее проводить профилактические мероприятия по предотвращению сальмонеллёза, чем пытаться устранить его вспышку и последствия инфекции, в числе которых могут быть значительные потери поголовья свиней, крупного рогатого скоты или птицы, значительное снижение качества конечного продукта и т.д.
К профилактическим мероприятиям на птицеферме можно отнести тщательный контроль убойной подготовки птицы - выдержки ее без корма, выбраковки больной и слабой птицы. На этапе убоя также требуется соблюдение ветеринарно-санитарных требований, на этапе первичной переработки - соблюдение температурного режима и режима охлаждения. Необходим постоянный контроль соответствия среды охлаждения микробиологическим показателям, а также регулярное исследование на наличие сальмонелл произведенной продукции и всех технологических поверхностей.
В настоящее время для обнаружения сальмонелл используют метод классической микробиологии, молекулярно-генетические методы и индикаторную диагностику. Если метод классической микробиологии и молекулярно-генетический методы позволяют оценить результаты через 24-48 часов от момента отбора пробы, то индикаторный метод справляется с этой задачей за 7-8 часов за счет использования новейших экспресс-технологий.
Классический микробиологический метод основывается на обогащении взятой пробы в питательной среде, которая может иметь различный состав. Для приготовления пробы мы берем 200 гр твердого или 200 мл жидкого продукта, разделяем этот объем на части по 25 гр или 25 мл. Твердый продукт при этом растирается. Далее подготовленные пробы высеваются для обогащения на селективную среду в соотношении 1:10 и одновременно делают посев материала для последующего инкубирования. После этого через определенное время оценивается рост колоний бактерий, если таковые присутствуют в пробах.
Для мониторинга сальмонеллы методом классической микробиологии необходима полноценная лаборатория. Это одно, а иногда и несколько помещений, в которых производится подготовка питательных сред, проб, где будет стоять стерильный бокс и лабораторное оборудование. Оборудование и содержание такой лаборатории это очень дорогостоящее мероприятие. Нельзя забывать и о том, что понадобится нанимать высококвалифицированный персонал, что также ощутимо для бюджета предприятия, особенно, если оно небольшое.
Также для обнаружения сальмонелл на предприятиях часто используют метод ПЦР-тестирования. С его помощью можно сделать все то же самое, что делает метод классической микробиологии, - определить физиологию микроорганизмов, их биохимические особенности - только быстрее, поскольку сальмонелла определяется по генетическому материалу.
Результаты тестирования по методу ПЦР можно получить уже через 14-18 часов от момента отбора пробы. Этот метод прост в применении. Достаточно просто загрузить образцы или пробы в установку и она сама произведет все необходимые действия, после чего выведет результат на экран. Перед загрузкой в аппарат отобранные образцы необходимо обогатить с помощью питательной среды. Для ПЦР-анализов не требуется полноценно оборудованная лаборатория, достаточно чистого помещения, где можно разместить установку и обустроить место для подготовки образцов, а также установить компьютер, к которому будет подключен аппарат для тестирования.
Самый быстрый метод выявления сальмонеллы - индикаторный тест. С его помощью можно обследовать не только твердые и жидкие продукты питания, но и различные технологические поверхности. Индикаторный тест способен выявить более 100 серотипов сальмонеллы.
Для проведения тестирования потребуется собственно индикаторный тест и инкубатор. В ампуле, которая находится вверху индикаторного теста содержится селективная среда, которая наращивает биомассу сальмонеллы. Она содержит антибиотик, который подавляет другую микрофлору, позволяя сальмонелле заполнить весь объем пробирки, выделяя при этом продукты жизнедеятельности, которые изменяют цвет среды. Если сальмонелла не обнаружена, то среда сохранит изначальный сероватый цвет.
Процедура проведения анализа очень простая. необходимо сделать смыв с помощью готового теста - прикоснуться им к исследуемой поверхности или опустить в исследуемую жидкость. После этого пробирка плотно закрывается и вставляется в инкубатор на предусмотренное инструкцией время и по окончании инкубации получаем результат, который очень легко интерпретировать.
Следует отметить, что если на животноводческом или птицеводческом предприятии обеспечена максимальная биологическая безопасность, проводятся регулярные уборочные и дезинфицирующие мероприятия в соответствии с регламентом, но при этом отсутствует мониторинг сальмонеллы и других вредоносных бактерий, не производится оценка качества уборки, то все равно сохраняется риск заражения. Мониторинг поможет понять, каким производственным участкам или этапам следует уделить большее внимание.
В ассортименте компании “НоваСнаб” есть индикаторные тесты для выявления сальмонеллы. Производитель тестов - немецкий бренд Hygiena. Это скрининг-тест для обнаружения сальмонелл на контактирующих с пищей поверхностях, а также на технологическом оборудовании. Тест проводится в два этапа. Первый этап - это отбор пробы и ее последующее обогащение. При необходимости можно записать место и время отбора пробы на наклейке на пробирке.
Для отбора пробы необходимо вытащить тампон из пробирки и провести им вдоль и поперек, при этом слегка вращая, по участку исследуемой поверхности размером 30x30 см. Это необходимо делать с небольшим нажимом на тампон для максимального контакта с поверхностью и более точного результата. В процессе отбора пробы нельзя дотрагиваться до тампона руками, это может привести к неверным результатам.
После окончания этой манипуляции тампон вставляется обратно в пробирку, крышка плотно закручивается и пробирка остается в неактивированном виде на 6 часов в термостате при температуре 37 градусов Цельсия для предварительного обогащения. Второй этап - активация тестов. Для этого нужно вытащить пробирку из термостата и переломить клапан пробирки, затем несколько раз наклонить его взад-вперед и несколько раз нажать, чтобы вся питательная среда из пробирки попала на тампон с пробой. После этого пробирку следует аккуратно потрясти в течение 3 секунд (это высвободит клетки с тампона и разрушит возможные воздушные пузырьки). Затем пробирка устанавливается в инкубатор на 18-42 часа. Положительные результаты можно увидеть уже через 24 часа. Результат не может считаться отрицательным, пока не прошло 48 часов с момента отбора пробы.
Для оценки результатов необходимо, удерживая пробирку прямо, сравнить цвет содержимого в окошке с цветовой шкалой на наклейке пробирки. Если цвет среды изменился с фиолетового на ярко-желтый в течение 24 часов, то образец можно считать условно положительным. Важно истолковывать изменение цвета самой среды, а не тампона.
Чтобы утилизировать пробирку, ее предварительно нужно автоклавировать, сжечь или погрузить в 20% хлорную известь на час, после чего отправить на специальный полигон по уничтожению биологически опасных отходов. Неиспользованные тесты следует хранить при температуре от 2 до 6 градусов Цельсия.
В настоящее время индикаторный метод выявления сальмонеллы, как и ПЦР-диагностика, не включен ни в одни рекомендации на государственном уровне. Рекомендуется производить исследования классическим микробиологическим методом, но в таком случае от момента отбора пробы до получения результата может пройти до 10 дней, что существенно затруднит функционирование предприятия в нормальном режиме. Поэтому индикаторные тесты сейчас очень распространены как на крупных производствах, так и на фермерских хозяйствах.
Компания “НоваСнаб” предлагает индикаторные тесты для выявления бактерий рода Сальмонелла InSite Salmonella и сопутствующее оборудование для инкубации ведущего немецкого бренда Hygiena. Мы также готовы обучить ваших сотрудников использованию этого теста на производстве, правильному отбору проб и интерпретации результатов. В ассортименте компании вы найдете все необходимое для борьбы с сальмонеллой - профессиональные моющие и дезинфицирующие средства, оборудование и аксессуары для уборки ведущих мировых брендов. Наши консультанты окажут вам всестороннюю помощь в организации работы отдела клининга вашего предприятия и обеспечении высокого уровня биологической безопасности вашего производства.
Вам может быть интересно: Инкубатор для микробиологических тестов